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HE染色實驗時有哪些需要注意的呢?

更新時間:2024-09-09      點擊次數:836
  HE染色實驗,全稱為蘇木精和伊紅染色方法,是病理學染色技術中最基本也是最重要的一種。該方法通過區分細胞核和細胞質的酸堿性特性,將它們分別染成藍色和紅色,從而滿足形態學觀察的需求。
  蘇木精為堿性天然染料,可使細胞核著色。細胞核內染色質的成分主要是DNA,DNA的雙螺旋結構中,兩條核苷酸鏈上的磷酸基向外,使DNA雙螺旋的外側帶負電荷,呈酸性,很容易與帶正電荷的蘇木精堿性燃料以離子鍵或氫鍵結合而被染色。蘇木精在堿性溶液中呈藍色,所以細胞核被染成藍色。
  細胞漿內主要成分是蛋白質,為兩性化合物。細胞漿的染色與pH值有密切關系。伊紅Y是一種化學合成的酸性染料,在水中離解成帶負電荷的陰離子,與蛋白質的氨基正電荷(陽離子)結合而使細胞漿染色,細胞漿、紅細胞、肌肉、結締組織,嗜伊紅顆料等被感染成不同程度的紅色或粉紅色,與藍色的細胞核形成鮮明的對比。
  HE染色實驗的注意事項:
  1、切片制備
  切片厚度大小:切片的厚度和大小會影響染色效果,因此需要根據實驗需求選擇合適的切片。
  固定清洗:將切片放入固定液中以防止組織中的水分蒸發,并保持組織結構的完整性。常用的固定液包括甲醛、乙醇等。之后用清水清洗切片,去除固定液的影響。
  2、固定清洗
  樣品制備:對于貼壁生長的細胞,胰酶消化后調整細胞濃度滴加于蓋玻片上,培養相應時間后取出并用PBS洗滌。
  樣品固定:用95%乙醇固定20分鐘,再用PBS洗滌兩次。
  3、染色沖洗
  染核:用蘇木素染液染色2-3分鐘,之后用自來水沖洗。若染色過深,可用1%鹽酸酒精溶液分色,再水洗。
  染胞質:浸入伊紅染液染色1分鐘,再次用自來水沖洗。
  4、封固觀察
  封固:吹干或自然晾干細胞爬片后,使用中性樹膠封片。
  鏡檢觀察:在顯微鏡下觀察染色效果。若染色不均勻或顏色不鮮明,可能需要調整染色時間和分化時間。
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